Изменения цитокинового профиля и его коррекция у собак с бактериальным дерматитом

Одной из самых частых патологий, с которыми ветеринарный врач сталкивается в практике, являются дерматиты различной этиологии.

По статистике количество обращений пациентов, имеющих дерматологические заболевания, с каждым годом становится все больше. Одним из факторов провоцирующих восприимчивость организма животных к аллергенам являются современные экологические условия.

Лечение кожных инфекционно-аллергических заболеваний домашних животных пока остается проблемой, требующей решения.

Известно, что важной составляющей патогенеза аллергодерматитов сопровождающимся в дальнейшем инфекционным, в частности бактериальным дерматитов, является цитокиновый фактор.

Целью данной работы было изучение уровня основных классов цитокинов при бактериальной экземе и влияние на эти показатели препарата Апоквель.

Материалы и методы.

Обследовано 12 собак разного пола, в возрасте от 1 до 7 лет. Всем животным было проведено цитологическое исследование (кокки, нейтрофилы, активный фагоцитоз) + посев – Staphylococcus intermedius. У всех животных диагностирован бактериальный дерматит (с клиническим проявлением в виде мокнущей экземы).

Все животные получали общепринятое лечение, включающее антибиотикотерапию Синулокс в дозе 20 мг/кг на 14 дней, местные обработки Хлоргексидином 2-4% на 14 дней, Омега-3 1 капсула на 10 кг в течение 21 дня.

5 собак получали только общепринятую терапию и составили контрольную группу (группа 1). 7 собак дополнительно к основной терапии получали препарат Апоквель (Группа 2). Препарат применяли в дозе 0,5 мг на 1 кг массы животного 2 раза в сутки, в течение 7 суток.

При поступлении и через 7 суток от начала лечения в периферической крови определяли уровень основных классов про- и противовоспалительных интерлейкинов (IL-1, IL-4, IL-17, TNFα, IFNγ).

Для определения уровня цитокинов сыворотки крови использовали соответствующие наборы ИФА (Canine Interleukin 1, IL-1 ELISA Kit; Dog Interferon γ, IFN-γ ELISA Kit; Dog interleukin 4, IL-4 ELISA Kit; Dog Tumor necrosis factor αTNF-α ELISA Kit, Cusabio, US; IL-17 Canine IL-17/IL-17A Quantikine ELISA Kit, R&D Systems, Inc.USA, Canada). Для учета результатов использовали многофункциональный микропланшетный считыватель Synergy HT (BioTek Inc, США).

Статистический анализ проводили с использованием статистического программного обеспечения, STATISTICA версия 10 (StatSoft.Inc., 2011)

Результаты исследования представлены в таблицах 1-5.

Таблица 1. Уровень IL-1 в периферической крови (пг/мл)

Примечание:

* - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с нормой.

Таблица 2. Уровень IL-4 в периферической крови (пг/мл)

Примечание:

* - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с нормой.

Таблица 3. Уровень IFNγ в периферической крови (пг/мл)

Примечание:

* - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с нормой.

# - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с группой 1

Таблица 4. Уровень TNFα в периферической крови (пг/мл)

Примечание:

* - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с нормой.

Таблица 5. Уровень IL-17 в периферической крови (пг/мл)

Примечание:

* - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с нормой.

# - Статистически достоверно (Р≤ 0,05) по сравнению с группой 1.

Уровень интерлейкина 1 (IL-1, табл. 1) при поступлении был достоверно, по сравнению с нормой, повышен у всех животных. После проведения терапии количество цитокина нормализовалось.

Концентрация интерлейкина 4 (IL-4, табл.2) была снижена у пациентов обеих групп при поступлении и также нормализовалась после лечения.

Количество интерферона гамма (IFNγ, табл.3) резко повышалось в обеих группах при поступлении. После лечения уровень IFNγ нормализовался в группе 2 и снижался, но не достигал нормы в группе 1.

Уровень фактора некроза альфа (TNFα, табл. 4) в крови животных обеих групп был повышен при поступлении у всех животных. После лечения нормализовался в группе 2 и имел выраженную тенденцию к нормализации в группе 1, однако, эти изменения достоверно отличались от нормы.

Уровень интерлейкина 17 (IL-17, табл.5) при поступлении был повышен у животных обеих групп. Через неделю показатели также были повышены относительно нормы, однако в группе 2 тенденция к снижению была достоверно более выражена, чем в группе 1.

Одно из наиболее существенных свойств IL-1 — это стимуляция пролиферации антиген чувствительных Т-лимфоцитов через усиление экспрессии рецепторов и индукции синтеза IL-2 и IL-4, формирование местной воспалительной реакции и пирогенного ответа на уровне организма при инфекционном поражении ^{[1, с. 100]}.

Увеличение продукции ИЛ-1 полученное в нашем исследовании, дает возможность предположить гиперактивацию иммунного ответа и воспаления.

IL-4 является плейотропным регулирующим фактором, изменение уровня которого свидетельствует о степени напряжения воспалительных реакций, косвенно – о процессах гемопоэза и аллергии ^[6].

В рассматриваемом случае снижение ИЛ-4 указывает на относительный дефицит гуморальных иммунных реакций и преобладании клеточных цитотоксических. То есть баланс Th1/Th2 зависимого иммунного ответа сдвинут в сторону провоспалительных цитокинов.

IFN-гамма совместно с другими цитокинами принимает участие в регуляции активности Th1-клеток и цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) ^[8].

Повышение уровня IFN-гамма у животных при поступлении отражение активации (а возможно и гиперактивации) иммунного ответа. Поскольку IFN-гамма обладает свойствами синергизма, можно предположить, что на фоне повышения концентрации провоспалительных цитокинов, их суммарный эффект увеличивается и это, в свою очередь, повышает вероятность развития нежелательных побочных эффектов (гиперактивность воспалительных реакций, дисбаланс регенераторных процессов).

TNFα индуцирует некроз инфицированных вирусом и опухолевых клеток. Эффект TNFα усиливается в присутствии интерферона ^[1;2].

В рассматриваемом случае повышение уровня TNFα можно связать с активирующим влиянием антигенов микроорганизмов и опосредованным действием других цитокинов, в частности INFγ.

Интерлейкин-17 (IL - 17) является провоспалительным цитокином, секретируемым активированными Т-клетками, важное звено в защите хозяина от внеклеточных бактерий и грибов ^[7]. Он принимает активное участие в иммуноопосредованных воспалительных процессах с эпидермальной гиперплазией ^[3].

Интерлейкин 17 – один из ключевых цитокинов в патогенезе зуда^[4].

В рассматриваемом случае повышение уровня интерлейкина 17, равно, как и других провоспалительных цитокинов, указывает на активацию цитотоксичности и Th1 иммунного ответа. Кроме того, повышение концентрации IL-17 несомненно обусловливает и формирование дисрегенераторных процессов и зудящих дерматозов.

Применение препарата Апоквель во многом способствовало быстрейшей нормализации иммунопатологических сдвигов, что коррелировало с более выраженными положительными клиническими данными.

(Oclacitinib, торговая марка Apoquel) - это синтетический циклогексиламино пирролопиримидиновый ингибитор Янус киназы, селективный для JAK1 ^[5]. Он блокирует трансдукцию сигнала активации JAK киназы и, таким образом, подавляет экспрессию провоспалительных цитокинов. Следует указать, что Оклацитиниб – цитостатик и его применение требует повышенной осторожности в отношении генерализации инфекционного процесса. В рассматриваемом случае использование препарата проводилось на фоне терапии антибиотиками.

Таким образом, при возникновении инфекционной экземы у собак наблюдается дисбаланс цитокинов сыворотки крови, проявляющийся в увеличении уровня IL-1, IL- 7, IFNγ, TNFα, снижении концентрации IL-4. То есть наблюдаются изменения, характерные для дисбаланса Th1/Th2 зависимого иммунного ответа в сторону провоспалительных цитокинов. То, в свою очередь, обусловливает гиперактивность воспалительных реакций, дисбаланс регенераторных процессов, развитие зудящего дерматоза. Использование ингибитора Янус киназы 1(JAK1) в значительной степени способствовало нормализации иммунологических показателей, что коррелировало с клиническим улучшением.

(Oclacitinib, торговая марка Apoquel) является перспективным иммунотерапевтическим препаратом при гиперактивации Th1 иммунного ответа.

Учитывая цитостатическое действие Оклацитиниба, использование препарата должно проводиться с соблюдением соответствующих предосторожностей в отношении инфекций, в частности, по показаниям, в сопровождении с антибиотикотерапией.